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茁彩生物?甲苯胺藍(lán)染色(蛋白質(zhì)染色)

發(fā)布時(shí)間: 2023-05-24  點(diǎn)擊次數(shù): 1667次

甲苯胺藍(lán)染色法是一種常用的蛋白質(zhì)染色方法,它可以用于檢測(cè)蛋白質(zhì)的存在和定量。該方法基于蛋白質(zhì)與甲苯胺藍(lán)(CoomassieBrilliant Blue)染料的相互作用,通過(guò)染色反應(yīng)來(lái)檢測(cè)蛋白質(zhì)。TWG CS-2 100-1.jpg


甲苯胺藍(lán)是一種有機(jī)染料,它具有強(qiáng)烈的吸附性和親和性,可以與蛋白質(zhì)中的氨基酸殘基(主要是賴氨酸、精氨酸和組氨酸)發(fā)生靜電作用和氫鍵作用,形成染色復(fù)合物。這種染色復(fù)合物可以在紫外線下發(fā)出藍(lán)色熒光,從而實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的檢測(cè)和定量。



甲苯胺藍(lán)染色法具有靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、成本低廉等優(yōu)點(diǎn),因此被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、分子生物學(xué)、生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。但是,該方法也存在一些局限性,如染色效果受蛋白質(zhì)種類(lèi)和含量的影響,染色后的蛋白質(zhì)不能再次利用等。因此,在實(shí)際應(yīng)用中需要根據(jù)具體情況選擇合適的染色方法。


實(shí)驗(yàn)流程:

1、石蠟切片脫蠟至水。

2、切片浸入甲苯胺藍(lán)溶液1-5min(軟骨和肥大細(xì)胞著色較快,染1min軟骨和肥大細(xì)胞即呈鮮艷的紫紅色,其他成分和細(xì)胞著淺藍(lán)色;尼氏體著色較慢需染3-5min,神經(jīng)元內(nèi)的尼氏體著深藍(lán)色,背景幾乎無(wú)色。如著色不夠可稍微延長(zhǎng)染色時(shí)間。)

3、水洗洗去多余染料(藍(lán)色在水里的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)也會(huì)稍許褪色)

4、脫水:無(wú)水乙醇I 2-5min-無(wú)水乙醇II 2-5min-無(wú)水乙醇III 2-5min-正丁醇2min-二甲苯透明數(shù)分鐘濕封。


結(jié)果判讀:

    可見(jiàn)尼氏小體深藍(lán)色顆粒,細(xì)胞核呈淡藍(lán)色,背景基本無(wú)色;或是肥大細(xì)胞呈紫紅色,背景淺藍(lán)色或是無(wú)色。 


注意事項(xiàng):

1、染完色的片子不要烤干后二甲苯透明封片,否則片子上極易出現(xiàn)水珠;

2、脫水的酒精最好用干凈的無(wú)水乙醇含水量不能太高否則易脫色;

3、染色時(shí)可稍過(guò)染,因?yàn)樵诿撍倪^(guò)程中藍(lán)色或紫紅色會(huì)緩慢褪色,如果背景過(guò)深可稍微延長(zhǎng)脫水時(shí)間至肉眼看組織為極淺藍(lán)色或近乎無(wú)色。但脫水時(shí)間也不能太長(zhǎng)否則顏色會(huì)全部脫色,并且肥大細(xì)胞的紫紅色會(huì)變成藍(lán)色。


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