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茁彩生物|一步法Elisa換新裝

發(fā)布時(shí)間: 2022-02-23  點(diǎn)擊次數(shù): 2054次

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首先,帶大家溫故下酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay,簡(jiǎn)寫(xiě)ELISA),此方法可用于研究領(lǐng)域中的許多靶標(biāo),包括細(xì)胞因子,趨化因子,生長(zhǎng)因子,磷酸特異性靶標(biāo),免疫球蛋白,免疫腫瘤學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)。由于技術(shù)方法成熟,操作流程簡(jiǎn)單,此方法學(xué)深受廣大科研工作者青睞。

那么,ELISA實(shí)驗(yàn)中具體又分為哪幾種檢測(cè)類(lèi)型呢?

01 夾心法


①將含有已知抗體的抗血清吸附在微量滴定板上的小孔里,洗滌一次;

②加待測(cè)抗原,如兩者是特異的,則發(fā)生結(jié)合,然后把多余抗原洗除;

③加入與待測(cè)抗原呈特異反應(yīng)的酶聯(lián)抗體,使形成“夾心";

④加入該酶的底物,若看到有色的酶解產(chǎn)物產(chǎn)生,說(shuō)明在孔壁上存在相應(yīng)的抗原。

02 間接法


此法是檢測(cè)抗體常用的方法。將已知抗原吸附于固相載體上,加入待測(cè)血清(抗體)與之結(jié)合,洗滌后,加酶標(biāo)抗體和底物進(jìn)行測(cè)定。

03 競(jìng)爭(zhēng)法


此法主要用于小分子物質(zhì)、激素、藥物及半抗原的定量測(cè)定。以測(cè)定抗原為例,將特異性抗體吸附于固相載體上,加入待測(cè)抗原和一定量的已知酶標(biāo)抗原,使二者競(jìng)爭(zhēng)地與固相抗體結(jié)合,經(jīng)過(guò)洗滌分離,最后結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原與待測(cè)抗原含量呈負(fù)相關(guān)。

到這里我們應(yīng)該會(huì)問(wèn)一句,什么叫“一步法" ?

不要著急,小Z先用“一步法"跟傳統(tǒng)方法做個(gè)對(duì)比:

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以上圖例,相信大家很明顯的看出“一步法"優(yōu)化了操作步驟,縮減了操作時(shí)間,避免了不必要的誤差。

此刻你們腦海里面應(yīng)該飄過(guò)很多問(wèn)號(hào)吧?



小Z再給你們剖析一下“一步法" 優(yōu)化方案

  • 梯度標(biāo)準(zhǔn)品(即用型)試劑盒提供已知濃度的6支標(biāo)準(zhǔn)品,可直接使用;

  • 樣本充足的情況下,離心后可以直接加樣,無(wú)需樣本稀釋?zhuān)苊馕廴荆?/p>

  • 一次性洗板,簡(jiǎn)約時(shí)間,減少誤差;

  • 直接讀數(shù),90分鐘搞定ELISA,實(shí)現(xiàn)時(shí)間上“質(zhì)"的飛躍;

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